T5 核酸外切酶是噬菌体来源的5'→3' 方向多功能核酸外切酶,同时具备单链 DNA 内切酶活性。该酶可高效消化线性、缺刻状态的单链 DNA 与双链 DNA,但不降解超螺旋完整双链 DNA。
凭借独特的底物识别特性,T5 核酸外切酶可精准消化线性残留片段、缺口 DNA,完整保留超螺旋质粒,是 Gibson 无缝组装、质粒纯化、DNA 片段修饰实验的核心工具酶,适配各类分子克隆实验体系。
1. 底物特异性强
专属降解线性、缺刻、单链 DNA,不破坏完整超螺旋质粒,可高效富集高纯超螺旋 DNA 模板。
2. 酶活纯度极高
经过重组蛋白纯化工艺处理,无杂酶污染,不含内源内切酶、外切酶、RNase 残留,实验背景干净、结果重复性强。
3. 降解效率稳定
优化重组表达工艺,酶活性高、反应速率稳定,可快速完成 DNA 末端消化,适配批量组装与高通量克隆实验。
4. 配套体系完善
搭配专用 10× 反应缓冲液,反应体系兼容性好、适配度高,无需复杂调试,上手即用,大幅降低实验误差。
| 货号 | 产品组分 | 规格 | 数量 |
| B28011A | T5 Exonuclease 核酸外切酶 | 1000 U | 1 |
| B28012A | 10×T5 反应缓冲液 | 3 mL | 1 |
储存条件:长期置于 -20℃ 低温密封保存,避免反复冻融,可长期稳定保留酶活性。
运输条件:全程低温冷链运输(≤0℃),保障运输过程酶活不损耗。
1. Gibson 无缝克隆组装:主流恒温组装核心酶,消化 DNA 片段 5' 端产生互补粘性末端,实现多片段高效无缝拼接。
2. 高纯度质粒制备:特异性降解线性 DNA、断裂缺刻质粒杂质,有效富集纯化超螺旋质粒,提升测序与转染质量。
3. DNA 片段修饰与纯化:清除残留线性扩增片段、不完全连接产物、冗余单链 DNA,优化分子克隆实验背景。
4. 各类分子生物学实验:适配载体改造、片段修剪、克隆体系优化等常规与高端分子实验。
T5外切酶可作用于哪些类型DNA?
线性双链DNA(dsDNA)、单链DNA(ssDNA)均可,如果目标DNA含有缺刻处,则从该位点起始进行消化。但该产品无法作用于超螺旋双链DNA。
T5外切酶与λ外切酶的主要区别是什么?
λ外切酶严格从双链DNA的5´末端起始消化,且偏好磷酸化的5´末端,对单链DNA无活性;T5外切酶不仅能从线性双链DNA的5´末端起始,还能从环状DNA的切刻或缺口处起始消化,并且具有单链DNA内切酶活性,底物范围更广。
使用T5外切酶降解DNA时,如何终止反应?
可向反应体系中加入EDTA至终浓度≥11mM,螯合反应体系中的Mg²⁺离子,或加入含有SDS的DNA上样缓冲液,使SDS终浓度达到0.08%。
