pPIC9K是一个用于蛋白表达的毕赤酵母蛋白表达载体,具有高拷贝的表达水平,携带氨苄青霉素(Amp)和卡那霉素(Kan)抗性基因,可在在组氨酸缺陷型培养基上筛选毕赤酵母转化体,并筛选其遗传霉素(G-418)抗性。由于α-Factor的存在,可进行外泌表达。
| 载体类型 | 毕赤酵母表达载体 |
| 克隆方法 | 多克隆位点,限制性内切酶 |
| 载体大小 | 9276 bp |
| 载体标签 | α-Factor |
| 载体抗性 | 原核:氨苄青霉素(Amp)、卡那霉素(Kan) 真核:遗传霉素(G-418) |
| 3’端测序引物序列 | 3’AOX:GGCAAATGGCATTCTGACAT |
| 5’端测序引物序列 | 5’AOX:GACTGGTTCCAATTGACAAGC |
高效表达:甲醇诱导的AOX1启动子,可实现外源基因的高水平表达;
易于纯化:分泌型表达策略使目的蛋白直接分泌至培养基中,简化了纯化流程,降低了生产成本;
糖基化修饰:作为真核生物,毕赤酵母能够对表达的蛋白质进行糖基化修饰,这提高蛋白质的稳定性和生物活性;
遗传稳定性:在毕赤酵母中具有良好的遗传稳定性;
多克隆位点:提供了多种限制酶切位点,便于外源基因的插入和改造。
| 货号 | 组分 | 规格 | 数量 |
| B61011A | pPIC9k | 20 μg | 1 |
-20℃保存,≤0℃运输。
本品常用于毕赤酵母表达系统的构建,可指导表达蛋白的分泌。
pPIC9K和pPIC9有何区别?
pPIC9K中的“K”表示卡那霉素抗性,在酵母中表现为G418,可以在大肠杆菌中作为卡那霉素筛选标记,在酵母中用于通过G418浓度梯度筛选高拷贝数转化子。
pPIC9K整合至毕赤酵母的哪个位点?
pPIC9K是整合型载体,需要通过同源重组整合到毕赤酵母的基因组上才能稳定存在和表达。根据你线性化载体所用的限制性内切酶,载体可以整合到不同的位点: 使用SacI线性化:将表达盒整合到AOX1基因座。在GS115菌株中获得Mut⁺(甲醇利用正常型)表型;在KM71菌株中获得Mutˢ(甲醇利用慢型)表型。 使用SalI或StuI线性化:将表达盒整合到his4基因座。在GS115中获得His⁺Mut⁺表型;在KM71中获得His⁺Mutˢ表型。 使用BglII线性化:将表达盒整合到GS115的AOX1区域,获得Mutˢ表型。
