本产品提供从总RNA或mRNA高效合成第一链cDNA的完整反应体系，其核心搭载了经过基因工程改造的HiFi-MMLV逆转录酶。该酶具有极低的RNase H活性、卓越的延伸能力以及出色的杂质耐受性，能够从容应对具有复杂二级结构或低丰度的RNA模板。在引物设计上，试剂盒采用Anchored Oligo(dT)₂₃VN引物精准锚定Poly(A)尾，有效确保了逆转录反应的特异性；同时提供随机引物供研究人员按需选择。该试剂盒合成的cDNA质量优异，全面适用于全长cDNA文库构建、常规PCR以及qPCR等关键下游实验。
高效合成，产量更高：HiFi-MMLV逆转录酶经多点突变改造，RNase H活性极低，延伸性能与模板亲和力大幅提升，cDNA合成效率与产量显著优于同类产品。
超高灵敏度：可高效利用pg级总RNA或mRNA完成逆转录，对低丰度转录本具有出色的检测灵敏度。
强效杂质耐受：优化的酶学体系对样本中的常见抑制剂具有良好耐受性，完美适配含杂质的粗提RNA或复杂临床样本。
无惧复杂结构：具备卓越的延伸与持续合成能力，有效克服高GC含量及复杂二级结构RNA带来的逆转录障碍。
引物策略灵活：提供Anchored Oligo(dT)₂₃VN和随机引物，可根据实验需求灵活搭配，兼顾mRNA特异性反转录与全转录组覆盖。
操作极简防污染：预混型设计实现即开即用，大幅简化加样流程，有效降低操作误差及污染风险。
下游应用广泛：合成的优质cDNA可直接用于PCR、qPCR及cDNA文库构建等多种核心实验。
| 货号 | 组分 | 规格 | 数量 |
| B17011A | RNase-free ddH₂O | 1 mL | 1 |
| B17021A | 2 × RT Mix | 1 mL | 1 |
| B17031A | HiScript II Enzyme Mix | 200 μL | 1 |
| B17041A | Oligo(dT)₂₃VN（50 μM） | 100 μL | 1 |
| B17051A | Random hexamers（50 ng/μL） | 100 μL | 1 |
注意：2×RT Mix含缓冲盐体系及dNTP，使用前需充分混匀；Enzyme Mix包含逆转录酶与RNase抑制剂，避免反复冻融；两种引物可单独或混合使用，依据实验需求选择。
-20℃保存运输。
本产品合成的第一链cDNA可广泛应用于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、常规PCR、基因表达分析、全长cDNA文库构建以及高通量测序模板制备等下游实验。
本试剂盒适用于哪些类型的RNA模板？
本试剂盒适用于总RNA、Poly(A)⁺mRNA及各类来源的RNA样本（如细胞、组织、血液等提取的RNA）。HiFi-MMLV逆转录酶经改造后具有更高的杂质耐受度，尤其适用于低纯度或部分降解的RNA样本，以及具有复杂二级结构或高GC含量的RNA模板。
应该如何选择逆转录引物？
试剂盒提供Anchored Oligo(dT)₂₃VN和Random Primers两种引物，可根据实验需求灵活选择： Oligo(dT)引物：特异性结合于mRNA的Poly(A)尾，适用于绝大多数真核生物mRNA的逆转录，特别适合全长cDNA合成。 随机引物：可结合RNA模板的多个位点，适用于不含Poly(A)尾的RNA（如原核RNA、rRNA等）以及mRNA 5′端区域的逆转录。 混合使用：将两种引物混合使用可兼具两者优势，提高覆盖度和cDNA得率。
合成的cDNA最长可达多少？
HiFi-MMLV逆转录酶具有优异的持续合成能力，可成功合成长达12 kb以上的cDNA。对于长片段cDNA（>5 kb）的合成，建议使用Oligo(dT)引物或基因特异性引物，并适当延长逆转录反应时间。
逆转录产物是否可以直接用于qPCR？
可以。本试剂盒合成的第一链cDNA可直接作为qPCR模板使用。建议将cDNA产物适当稀释（通常5~10倍）后添加至qPCR体系中，以避免高浓度cDNA对荧光信号产生抑制。
RNA模板是否需要预先变性？
对于具有复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，建议在逆转录前将RNA与引物混合后于65℃孵育5分钟，随即置于冰上冷却2分钟，以打开RNA的二级结构，提高引物结合效率和逆转录成功率。
无RT对照（No-RT Control）出现扩增信号，是什么原因？
可能的原因包括： 基因组DNA污染：RNA提取过程中残留的基因组DNA被PCR扩增。建议使用DNase I对RNA样本进行预处理，或使用带gDNA去除功能的逆转录试剂盒。 引物二聚体或非特异性扩增：检查qPCR引物设计是否合理，必要时重新设计。 试剂污染：更换新的无核酸酶水和引物重复实验，在超净工作台内配制反应体系，减少气溶胶污染。
cDNA产量低或无产物，应如何排查？
建议按以下顺序排查： RNA模板：检查RNA是否降解（琼脂糖凝胶电泳检测）；确保RNA浓度和纯度合适（A260/280在1.8~2.1之间）；避免模板反复冻融。 引物：检查引物是否降解；Oligo(dT)引物不适用于不含Poly(A)尾的RNA。 反应体系：确认各组分是否正确添加，酶是否失活（更换新酶）。 反应程序：确认孵育温度和时间是否合适；对于复杂模板可适当提高温度或延长孵育时间。
逆转录产物可以长期保存吗？
合成的cDNA建议于-20℃短期保存（1~2周），长期保存建议于-80℃。应避免反复冻融，可分装保存以减少降解风险。
