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Lba Cas12a(Cpf1)

Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶

Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶
Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶

货号:D26011A

价格:

规格:

  • 70 pmol
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产品简介

Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶源自毛螺菌科细菌 ND2006 菌株,是II 类 V 型 CRISPR 系统的可编程 RNA 介导 DNA 内切酶,为主流 Cas9 核酸酶的优质替代编辑工具。

相较于传统 Cas9 蛋白,本款 Cas12a 无需辅助 tracrRNA,仅依靠 41–44 nt 的短链 crRNA 即可完成靶向识别与切割。该酶特异性识别基因组5′-TTTV 保守 PAM 序列,切割位点位于 PAM 下游 17–18 bp 处,切割后形成5′粘性突出末端,更利于基因定点编辑。

蛋白两端均融合 SV40 核定位信号(NLS),双 NLS 结构大幅提升蛋白入核效率,有效提升体内外基因编辑成功率,适配多种生物样本编辑实验。

产品优势

1. 靶向范围更广

专属识别 TTTV 富 T 型 PAM 序列,可精准靶向 Cas9 难以覆盖的基因组 AT 富集区域,极大拓展全基因组编辑靶点选择范围。

2. 向导设计更简便
仅需单一短链 crRNA 即可完成靶向引导,无需搭配 tracrRNA,合成成本更低、实验构建流程更简单,新手友好度高。

3. 切割性能优异
独特的粘性末端切割模式,区别于 Cas9 平末端切割,更适配精准敲除、片段插入、基因修饰等精细化编辑实验。

4. 入核效率高效
蛋白 N 端、C 端双重 SV40 核定位信号加持,显著提升真核细胞内的核转运效率,有效提高整体编辑活性。

5. 温度适配性强
拥有超宽活性温度区间(16–48℃),低温环境下仍可稳定保持高酶活,特别适配斑马鱼、非洲爪蟾等冷血动物活体基因编辑实验。

6. 双重酶活多功能
兼具双链 DNA 特异性顺式切割活性与单链 DNA 非特异性反式切割活性,既能满足基因编辑需求,也适用于体外核酸快速检测、分子诊断等场景。

7. 高纯度高稳定性
经 SDS-PAGE 电泳验证,蛋白纯度≥90%,每批次均通过严格活性与纯度质控,蛋白稳定性强、实验重复性高,支持高要求科研实验。

规格组分

货号产品组分浓度规格数量
B57011ALba Cas12a(Cpf1)核酸酶1 μM70 pmol1

缓冲液体系:300 mM NaCl、10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、50% 甘油,pH=7.4(25℃)

储存条件

1. 长期保存:推荐 -25℃ ~ -15℃ 低温冷冻保存,可长期维持高酶活;

2. 短期使用:4℃环境可短期存放 12 个月以内;

3. 注意事项:严禁反复冻融,建议收到产品后按需分装保存,最大程度保留酶活性;冻干粉版本可 4℃干燥密封长期储存。

产品应用

本款 Lba Cas12a 核酸酶适配体内外多种 CRISPR 实验体系,是多功能科研工具酶,核心应用如下:

1. 哺乳动物细胞、斑马鱼、爪蟾等模式生物的精准基因敲除、基因编辑与基因功能验证;

2. 体外双链 DNA 特异性定点酶切、载体构建、片段修饰实验;

3. 基于 Cas12a 反式切割特性的核酸检测、病原分子诊断、高通量筛查技术开发;

4. 高通量基因组文库筛选、靶点验证、新型编辑体系研发等前沿科研场景。

体外切割实验中无切割产物或切割不完全,可能是什么原因?

可能原因包括: 摩尔比例不当:建议保持Lba Cas12a : gRNA : 靶标位点的摩尔比为10:10:1或更高。 gRNA序列设计不合理:需验证gRNA的序列和设计是否与靶标位点匹配。 gRNA质量不佳:通过凝胶电泳验证gRNA的完整性。 缓冲体系不适宜:请使用推荐的反应缓冲液。 稀释方式不当:如使用100 µM高浓度酶进行体外切割实验,可先用Lba Cas12a Diluent稀释至1 µM后再使用;补充10 mM DTT至反应体系中可能有助于提高切割效率。

Lba Cas12a的gRNA如何设计与获得?

Lba Cas12a的gRNA长度为41–44个核苷酸。需设计一段与靶标位点互补的crRNA序列,确保靶标位点对侧DNA链上存在5′ TTTV PAM序列。gRNA可通过体外转录或化学合成获得。需注意,用于Spy Cas9的sgRNA合成试剂盒不适用于Lba Cas12a的gRNA合成。

Lba Cas12a的反应条件是什么?

推荐使用1× NEBuffer™ r2.1反应缓冲液,于37℃孵育进行体外切割反应。反应结束后可通过65℃孵育10分钟使酶热失活。

Lba Cas12a适用于哪些物种的基因编辑?

Lba Cas12a在16–48℃温度范围内均具有活性。由于能在较低温度下保持活性,特别适用于斑马鱼、非洲爪蟾等冷血动物的基因编辑。同时也可用于常规哺乳动物细胞的基因编辑,双NLS设计提高了入核效率。

高浓度Lba Cas12a(100 µM)适用于哪些实验?

高浓度液体制剂(M0653T)适用于显微注射、电转和脂质体转染等需要较高酶浓度的应用场景。用于体外切割实验时,可先用Lba Cas12a Diluent稀释至1 µM后再使用。

Lba Cas12a的反式切割活性有何用途?

除特异性切割靶标双链DNA外,Lba Cas12a还具有非特异性的反式切割单链DNA活性。这一特性可应用于体外核酸检测与诊断(如CRISPR Diagnostics),通过报告探针的切割产生可检测信号。

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