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产品使用问题

热启动酶扩增程序与常规PCR扩增相比,需要注意什么?可以用于哪些样本的扩增?

热启动酶需要在高温下启动活性,使用时建议预变性时间设置在3-5min。过长的预变性会导致酶损失部分活性,时间太短造成酶活未完全激发。

热启动酶主要可用于以下样本:

①复杂样本:对于肿瘤、血液、土壤等杂质较多的困难样本,普通Taq酶极易导致假阳性。热启动酶能有效抵御杂质干扰,大幅减少非特异性扩增和引物二聚体的产生。

②低丰度靶标:热启动酶能显著提高反应的特异性和灵敏度,使目的片段获得更多输出,非常适合qPCR及低拷贝基因检测。

快速Taq酶和普通Taq酶有什么区别?是否可用于长片段扩增?

相比于普通Taq酶1min/kbp,快速Taq酶优化了序列提高扩增速度到15s/kbp,节省大量时间。同时在qPCR平台上以更短的时间提供准确的定量和可靠性。

对于长片段扩增,Zymagen的快速Taq PCR预混液以质粒为模板成功扩增出明显的8kbp的目的条带,但如果追求极高的扩增产量不建议扩增2kbp以上的DNA片段。

使用动物组织直扩PCR预混液进行小鼠组织直接pcr ,组织选用鼠趾还是鼠尾?是否需要纯化?

产品未测试过鼠趾效果,一般选用鼠尾,样品无需纯化,可选择离心取上清。

miRNA逆转录试剂盒能否用于常规mRNA的逆转录?

不建议。本试剂盒是专门针对miRNA逆转录开发的,逆转录引物设计有差异,且逆转录酶经过定向改造,对较长的RNA模板逆转录效率较低。常规mRNA的逆转录请使用专门的mRNA逆转录试剂盒。

miRNA qPCR试剂盒能否用于TaqMan探针法qPCR?

产品为SYBR Green嵌合荧光法专用预混液,未针对探针法进行优化,仅适用于SYBR Green染料法qPCR。如需使用探针法,请选用相应的探针法专用试剂盒。

qPCR中,探针法相比荧光染料定量法有什么优势?

相比于染料法,探针法特异性极高。荧光信号的产生不仅需要引物与模板结合,还需要探针精准地结合在上下游引物之间的靶序列上。这种“双重验证”机制极大地降低了非特异性扩增的干扰,通常不需要做熔解曲线分析,结果更加准确可靠。