本产品在无缝克隆试剂盒基础上优化配方,添加了稳定剂,提高了长片段和多片段的无缝克隆效率。
多片段、长片段高效连接:对于多片段无缝克隆,可连接至多10个总长8kbp或4个总长10kbp的DNA片段;对于长片段无缝克隆,可连接长达10kbp单一DNA片段。
产品稳定性提高:反复冻融20次仍可保留约50%活性。
| 货号 | 组分 | 规格 | 数量 |
| B03021A | PLUS Seamless Cloning Mix(2×) | 100 μL | 1 |
| B03022A | PLUS Seamless Cloning Mix(2×) | 200 μL | 1 |
-20℃保存,≤0℃运输。
本品可通过单次反应将至多10个总长8kbp或4个总长10kbp的DNA片段通过同源重组形式与线性化载体连接。
如何选择无缝克隆试剂盒和增强型无缝克隆试剂盒?
无缝克隆试剂盒满足多数场景下的无缝克隆需求,对于多片段可实现至多4个片段且总长4000bp的无缝克隆。 若使用的片段数量>4,或单片段长度>4000bp,推荐使用增强型无缝克隆试剂盒。
使用增强型无缝克隆试剂盒时,对插入的片段数量和大小有限制吗?
片段总数≤8且总长≤10000bp即可,对于单独的片段无大小限制。
进行多片段无缝克隆时,出现大量载体自环化或未完全重组的假阳性转化子,如何解决?
对于多片段无缝克隆,可以适当延长片段之间的同源臂(如35bp-50bp),提高正确重组率。另外,应确保使用的载体完全线性化。
进行长片段无缝克隆时,出现大量假阳性转化子,如何解决?
不论单片段无缝克隆或多片段无缝克隆,若单一片段的长度≥4000bp,应考虑降低无缝克隆反应体系中的核酸总量至100ng以下。
多片段无缝克隆时,转化子数量较少
转化子数量与插入片段数量和总长度成反比,可考虑搭配Zymagen5α感受态细胞进行转化试验,可显著提高转化子数量。
