本产品专为qPCR实验设计，基于高效的HiFi-MMLV逆转录酶，可从总RNA或mRNA精准合成第一链cDNA。试剂盒采用预混液形式，操作极为简便快捷。针对RNA样本易受基因组DNA干扰的痛点，本产品内置基因组清除模块，可在逆转录前有效去除残留的基因组DNA，保障定量结果的准确性。此外，该试剂盒生成的cDNA完美兼容SYBR Green染料法和探针法，满足不同实验体系的检测需求。
高效逆转录，qPCR结果更可靠：HiFi-MMLV逆转录酶经多点突变改造，RNase H活性显著降低，延伸性能与模板亲和力大幅提升；配合针对qPCR优化的反应缓冲体系，可实现更高的cDNA合成效率和更小的Ct值。
内置基因组清除模块，数据真实可信：试剂盒包含独立的基因组清除组分，可在逆转录前快速去除RNA模板中残留的基因组DNA，有效避免基因组DNA对qPCR定量的干扰，无需跨内含子设计引物。
操作简便，省时高效：预混液形式即开即用，只需加入模板RNA和水即可进行反应；优化的反应体系可显著缩短逆转录时间，加快实验进程。
灵敏度高，适用低丰度样本：可高效利用pg级总RNA模板，对低丰度转录本具有出色的检测灵敏度；对具有复杂二级结构或高GC含量的RNA模板同样具有良好的逆转录效果。
引物选择灵活，覆盖全面：配备Anchored Oligo(dT)₂₃VN和Random Primers两种引物，可根据实验需求灵活选择或混合使用，兼顾mRNA的特异性反转录和各类RNA的全面覆盖。
产物兼容性广：合成的cDNA可直接用于SYBR Green染料法及探针法qPCR，亦适用于基因表达分析、miRNA检测等多种下游应用。
| 规格 | 组分 | 规格 | 数量 |
| B18011A | RNase-free ddH2O | 1 mL | 4 |
| B18021A | Enzyme Mix* | 200 μL | 1 |
| B18031A | 5×All-in-one qRT SuperMix* | 800 μL | 1 |
| B18041A | No RT Control Mix* | 40 μL | 1 |
本产品含有热敏型DNase，Enzyme Mix、5 × All-in-one qRT SuperMix 及 No RT Control Mix 均需置于冰上操作，使用后立即放回 -20℃ 保存，避免反复冻融。
-30~-15℃保存，≤0℃运输。
本产品合成的cDNA适用于SYBR Green法和探针法实时荧光定量PCR，可对细胞、组织、血液等多种来源RNA样本进行基因表达水平定量分析，亦适用于miRNA检测、病原体RNA检测及基因拷贝数测定等低丰度靶标检测场景。
本试剂盒适用于哪些类型的RNA模板？
本试剂盒适用于总RNA、Poly(A)⁺mRNA及各类来源的RNA样本（如细胞、组织、血液等提取的RNA）。HiFi-MMLV逆转录酶经改造后具有更高的杂质耐受度，尤其适用于低纯度或部分降解的RNA样本，以及具有复杂二级结构或高GC含量的RNA模板。
应该如何选择逆转录引物？
试剂盒提供Anchored Oligo(dT)₂₃VN和Random Primers两种引物，可根据实验需求灵活选择： Oligo(dT)引物：特异性结合于mRNA的Poly(A)尾，适用于绝大多数真核生物mRNA的逆转录，特别适合全长cDNA合成。 随机引物：可结合RNA模板的多个位点，适用于不含Poly(A)尾的RNA（如原核RNA、rRNA等）以及mRNA 5′端区域的逆转录。 混合使用：将两种引物混合使用可兼具两者优势，提高覆盖度和cDNA得率。
合成的cDNA最长可达多少？
HiFi-MMLV逆转录酶具有优异的持续合成能力，可成功合成长达12 kb以上的cDNA。对于长片段cDNA（>5 kb）的合成，建议使用Oligo(dT)引物或基因特异性引物，并适当延长逆转录反应时间。
逆转录产物是否可以直接用于qPCR？
可以。本试剂盒合成的第一链cDNA可直接作为qPCR模板使用。建议将cDNA产物适当稀释（通常5~10倍）后添加至qPCR体系中，以避免高浓度cDNA对荧光信号产生抑制。
RNA模板是否需要预先变性？
对于具有复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，建议在逆转录前将RNA与引物混合后于65℃孵育5分钟，随即置于冰上冷却2分钟，以打开RNA的二级结构，提高引物结合效率和逆转录成功率。
无RT对照（No-RT Control）出现扩增信号，是什么原因？
可能的原因包括： 基因组DNA污染：RNA提取过程中残留的基因组DNA被PCR扩增。建议使用DNase I对RNA样本进行预处理，或使用带gDNA去除功能的逆转录试剂盒。 引物二聚体或非特异性扩增：检查qPCR引物设计是否合理，必要时重新设计。 试剂污染：更换新的无核酸酶水和引物重复实验，在超净工作台内配制反应体系，减少气溶胶污染。
cDNA产量低或无产物，应如何排查？
建议按以下顺序排查： RNA模板：检查RNA是否降解（琼脂糖凝胶电泳检测）；确保RNA浓度和纯度合适（A260/280在1.8~2.1之间）；避免模板反复冻融。 引物：检查引物是否降解；Oligo(dT)引物不适用于不含Poly(A)尾的RNA。 反应体系：确认各组分是否正确添加，酶是否失活（更换新酶）。 反应程序：确认孵育温度和时间是否合适；对于复杂模板可适当提高温度或延长孵育时间。
逆转录产物可以长期保存吗？
合成的cDNA建议于-20℃短期保存（1~2周），长期保存建议于-80℃。应避免反复冻融，可分装保存以减少降解风险。
