本产品为预混型PCR反应体系,预混组分包含Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、dNTPs及兼具稳定与增强功能的辅助成分。即用型设计大幅简化操作流程,既可缩短反应准备时间,又能有效降低人为操作误差及外源污染风险。经优化的MasterMix配方可保障扩增产物高产率,同时具备优异的批内重复性与批次间稳定性。
体系未添加电泳指示染料,用户可根据实验需求在电泳前自行补加适量上样缓冲液。扩增产物3′端带有突出的“A”尾,可直接用于T/A克隆。该产品性能稳定、适配性强,广泛适用于DNA片段PCR扩增、序列测定等常规分子生物学实验场景。
经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
| 货号 | 组分 | 规格 | 数量 |
| B01041A | Taq PCR Master Mix(2×) | 1 mL | 1 |
| B01041A | Taq PCR Master Mix(2×) | 1 mL | 5 |
注意:2×Taq MasterMix含有Taq DNA Polymerase, 3 mM MgCl2和400 µM each dNTP 。
-20℃保存运输。
本品主要适用于PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验。
兼容模板类型
本产品适用于常规DNA(基因组≤15 kb,cDNA≤10 kb,质粒≤15 kb)、高GC/AT(GC含量24%–79%)、动植物裂解液及菌液/菌斑。若以酵母菌液/菌斑为模板扩增长片段,可延长延伸时间(5–10 sec/kb)或先进行粗裂解。
扩增效率低或无条带
建议按顺序排查: ①引物是否降解,设计是否特异(可用BLAST验证); ②模板是否新鲜,避免反复冻融,粗品可能含抑制物(适当稀释),cDNA需保证RNA质量; ③酶是否失活(更换新酶); ④反应体系是否配制准确(重新配制); ⑤程序参数:验证变性温度准确性,优化退火温度(梯度),确认延伸时间足够。
产量偏低
主要因引物降解或模板质量差(建议新鲜制备);若模板不足,可用首次扩增产物倍比稀释后二次扩增。程序上可梯度优化退火温度、延长延伸时间或增加循环数。
非特异性扩增
多由引物非特异性结合或形成二聚体引起,可降低引物浓度或重新设计。模版不纯、污染、过量都是重要影响因素,建议纯化并参考说明书调整用量。程序调整:若杂带小于目的条带,提高退火温度并减少循环;若杂带较大,缩短延伸时间并减少循环。
电泳条带弥散或拖尾
确保制胶完全融化;检查引物是否降解;避免模板降解或过量(电泳检测)。若扩增长片段cDNA,需保证逆转录产物质量(可不用随机引物重做)。此外,优化退火温度梯度有助于改善。
空白对照出现条带
可能因引物与非靶序列同源,或产物污染(与目的条带大小一致时)。建议更换Mix、水或引物,在超净台内操作,防止气溶胶和交叉污染。若存在小片段核酸污染,可尝试巢式PCR加以消除。
