高灵敏度定量：可在pg级总RNA样本中稳定检出目的miRNA，并在宽广的定量范围内保持良好的线性关系，确保数据准确可靠。
强特异性识别：依托定向筛选的核心酶、双抗体热启动技术及优化缓冲体系，展现出卓越的3′端错配识别能力。能够精准区分同家族中仅相差单碱基的miRNA，非特异识别率低于5%。
全仪器兼容：内置特殊配方的ROX被动参比染料，无需根据仪器型号调整浓度，广泛适用于各类主流qPCR平台。
操作便捷高效：附赠人、大鼠、小鼠通用的U6内参引物及通用反向引物，用户仅需自行设计特异性正向引物，即可轻松开展实验。
| 货号 | 组分 | 规格 | 数量 |
| B22011A | 2 × miRNA Unimodal SYBR qPCR Master Mix | 1 mL | 1 |
| B22021A | mQ Primer R（10 μM） | 40 μL | 1 |
| B22031A | U6 Forward Primer（10 μM） | 40 μL | 1 |
| B22041A | U6 Reverse Primer（10 μM） | 60 μL | 1 |
注意：2 × Master Mix含SYBR Green I，配制和保存时应避光操作；mQ Primer R序列为：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT；U6内参引物适用于人、大鼠、小鼠样本，如为其他物种需自行设计合成内参基因引物。
-30~-15℃避光保存，≤0℃运输。Master Mix解冻后可于2~ 8℃避光条件下稳定存放6个月。
本产品适用于miRNA表达谱分析、组织/细胞中miRNA表达水平检测及不同样本间miRNA差异表达分析等实验。
为什么实验组完全没有扩增信号？
可能的原因包括： RNA模板质量不佳：检查RNA是否降解，建议使用琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整度。 模板用量不足：建议投入0.5–1 μg total RNA，不同miRNA表达丰度不同，低丰度miRNA可能需要增加模板量。 逆转录产物与qPCR试剂不匹配：miRNA qPCR试剂盒通常需要与同品牌的逆转录试剂盒配套使用，因为逆转录引物上设计有特定的PCR引物结合序列，不同厂家的引物系统可能不兼容。 目的miRNA在该样本中不表达：可设置阳性对照（如U6或已知高表达miRNA）确认体系正常。
扩增曲线异常（平台期下降、复孔重复性差）？
可能原因及解决方案： cDNA模板浓度过高：建议将cDNA适当稀释（5–10倍）后再进行qPCR。 引物浓度不适宜：建议miRNA特异性正向引物的终浓度约为200 nM。 反应体系配制不均：建议使用预混液形式减少加样误差，加样后充分混匀并短暂离心。
熔解曲线出现双峰或宽峰？
可能原因及解决方案： 非特异性扩增：尝试将延伸温度从60℃提高至65℃。 引物二聚体：适当降低引物浓度，并注意上下游引物的浓度配比。 引物设计不合理：建议重新设计特异性正向引物，确保其特异性识别目标miRNA序列。
如何提高miRNA qPCR的检测特异性？
miRNA家族成员之间序列高度相似，有时仅相差1–2个碱基，特异性检测是miRNA qPCR的关键挑战。本产品核心酶经定向筛选，具备出色的3′端错配识别能力，配合高封闭率双物种抗体热启动技术，可有效区分同一家族中序列高度相似的miRNA成员。建议在设计正向引物时尽量覆盖miRNA的3′端差异区域，以进一步提高特异性。
如何选择合适的ROX Reference Dye？
本产品已预混特殊配方的ROX Passive Reference Dye，适用于多种qPCR平台。不同qPCR仪器对ROX的需求不同： 需要高ROX的仪器：ABI 7900HT、StepOnePlus、7500等 需要低ROX的仪器：ABI 7500 Fast、ViiA 7等 不需要ROX的仪器：Bio-Rad CFX系列、Roche LightCycler系列等 本产品已预混了兼容各类仪器的ROX浓度，无需根据不同仪器自行调整。
U6内参的Ct值与目的miRNA差异过大怎么办？
U6是snRNA，长度约为100 nt，其表达丰度通常远高于大多数miRNA，因此Ct值相差较大属于正常现象。但需注意： U6并非真正的miRNA，其长度（约100 nt）恰好处于常规RNA提取柱的截留范围边缘，如果使用了短链RNA富集步骤，U6可能会在提取过程中部分损失，导致Ct值失去参考意义。 在血清、血浆、外泌体等非常规样本中，U6含量不稳定且个体差异较大，建议根据样本类型选择更适合的内参（如miR-16、miR-103等）。
miRNA qPCR的引物如何设计？
本试剂盒提供通用反向引物（mQ Primer R），序列为AGTGCAGGGTCCGAGGTATT，用户只需自行设计特异性正向引物即可。 正向引物应根据目标miRNA的成熟序列设计，建议Tm值在55–60℃左右。 扩增产物长度通常约为80 bp。 如使用茎环法，逆转录引物可根据miRNA序列在茎环序列上添加6个碱基即可。也可使用引物设计软件辅助设计。
本试剂盒能否用于TaqMan探针法qPCR？
本产品为SYBR Green嵌合荧光法专用预混液，未针对探针法进行优化，仅适用于SYBR Green染料法qPCR。如需使用探针法，请选用相应的探针法专用试剂盒。
