本款重组蛋白酶 K 为基因工程重组表达丝氨酸蛋白酶,通过将真菌来源蛋白酶 K 功能基因导入毕赤酵母表达系统,经高密度发酵与多重纯化工艺制备而成。
该酶拥有广谱蛋白水解能力,可高效切割绝大多数氨基酸羧基端肽键,对脂肪族、芳香族氨基酸底物亲和力更高。产品经过严苛质控筛查,无 DNase、RNase、内切酶、外切酶核酸污染,纯度满足高端核酸提取、建库测序、分子克隆等实验标准。
相较于普通蛋白酶 K,本品最大特色为可完全热灭活,55℃恒温处理 10 分钟即可彻底失活,无需额外纯化除酶,支持单管一体化完成样本处理,大幅简化分子实验流程。
1. 彻底热灭活,极简实验流程
普通蛋白酶 K 加热后仍存在残留活性,干扰下游实验。本产品热敏性能优异,低温加热即可完全失活,实现样本消化 — 加热灭活 — 直接上机单管操作,省去磁珠纯化、反复洗脱步骤,杜绝酶残留污染。
2. 酶活稳定,底物适配广谱
基因定点改造后,在保留快速热失活特性的同时,完整继承野生型蛋白酶 K 的水解活性与底物特异性,可高效降解各类生物样本中的杂蛋白、残留酶蛋白。
3. 超高纯无杂酶,实验零干扰
严格的蛋白纯化与质控体系,无各类核酸酶、蛋白酶杂质残留,实验背景干净稳定,适配测序、PCR 扩增、微量样本制备等高精实验场景。
4. 抗逆性强,体系兼容性极高
耐受复杂反应环境,在不同盐浓度、常规缓冲液、EDTA、DTT 及去污剂体系中均可稳定工作;最佳活性区间为 20–40℃、pH 7.0–9.5,在 SDS、低浓度螯合剂环境中仍能保持高效水解能力。
5. 适配微量与高通量实验
全程单管操作,最大程度减少核酸样本转移损耗,显著提升低起始量样本回收率,适配自动化提取设备、高通量样本筛查体系。
| 货号 | 组分 | 浓度 | 规格 | 数量 |
| B59011A | 重组蛋白酶 K | 120 units/mL | 100 mg | 1 |
1. 最优反应条件:pH 7.0–9.5、20–40℃,长期高于 35℃环境会降低酶活稳定性;
2. 耐受≤10 mM EDTA 螯合剂体系,适合常规核酸提取环境;
3. 体系尿素浓度>2 M 会抑制酶活性,需规避高尿素环境;
4. PMSF 等丝氨酸蛋白酶抑制剂会阻断酶反应,实验体系请勿添加;
5. 低浓度去污剂可增效:≤1% SDS 可提升水解效率,2.5% 以内 SDS、1.5% 以内 Triton X-100 不会抑制酶活性。
缓冲液体系:20 mM Tris-HCl、1 mM CaCl₂、50% Glycerol,pH 7.4(25℃)
1. 长期保存:推荐 -25℃ ~ -15℃ 密封冷冻保存,长期稳定锁活;
2. 短期保存:1 年内常规使用可存放于 4℃环境;
3. 保存建议:严禁反复冻融,收货后按需分装储存,最大程度保留活性;冻干粉剂型可在 4℃干燥密封条件下长期存放。
1. 核酸样本制备:基因组 DNA、总 RNA 提取,消化样本杂蛋白,彻底去除内源 RNase、DNase 干扰;
2. PCR 产物优化:降解扩增残留聚合酶蛋白,消除酶残留影响,提升分子克隆成功率;
3. 病理原位实验:组织切片预处理消化,适配原位杂交实验体系;
4. 高通量建库测序:DNA/RNA 文库构建过程中去除蛋白杂质,保障建库质量;
5. 生物制药检测:去除生物样本、制剂中的杂蛋白杂质,满足制药质检标准;
6. 微量 / 自动化实验:适配低浓度核酸样本、高通量自动化提取平台。
热敏蛋白酶K与普通蛋白酶K有何区别?
普通蛋白酶K热失活困难,即使加热处理也难以完全灭活,残留酶活性可能干扰后续实验。热敏蛋白酶K经基因工程改造,在55℃下温育10分钟即可完全热失活,无需额外的纯化步骤即可在同一反应管内进行后续酶促反应,简化工作流程、减少样品损失。
热敏蛋白酶K在什么条件下活性最佳?
本品在20–40℃、pH 7.0–9.5范围内活性最佳。在多种反应缓冲液类型、盐浓度、洗涤剂以及DTT和EDTA环境下均具有良好活性。在SDS或尿素存在下以及很宽的pH范围(pH 4–12.5)内均有活性。
热敏蛋白酶K的失活条件是什么?
在55℃下温育10分钟即可完全热失活。失活后无需额外纯化步骤,可直接在同一反应管内进行后续酶促反应。
热敏蛋白酶K是否有核酸酶残留?
本品经严格质控,不含核酸内切酶、外切酶、DNase或RNase污染活性,确保不会对核酸模板或扩增产物造成降解,适合测序和扩增样本制备等对纯度要求较高的应用。
热敏蛋白酶K能否用于去除PCR体系中的聚合酶?
可以。本品可在55℃下10分钟完全失活,因此可在PCR结束后加入热敏蛋白酶K消化去除体系中的DNA聚合酶,随后通过热处理使蛋白酶K自身失活,无需额外的纯化步骤即可进行后续连接或克隆实验。
热敏蛋白酶K适用于哪些低起始量样本?
本品尤其适用于低起始量样本、自动化操作和高通量应用。通过在单管内完成消化和失活,免除磁珠纯化和多个洗脱步骤,最大程度减少样品损失,提升样本利用率。
